اثر سلنیوم بر میزان گونه های واکنش گر اکسیژنی حاصل از کشت فولیکول های پره آنترال تخمدان های انجماد شیشه ای شده موش با دو روش رایج و پوشش مستقیم

تغییر شرایط فیزیکی و شیمیایی بافت تخمدانی و عملکردی آن در طی پروسه انجمادی و بلوغ آزمایشگاهی موجب اکسیداتیو استرس می شود. برای جلوگیری از تشکیل اکسیداتیو استرس، آنتی اکسیدان استفاده می شود و سلنیوم به عنوان بخش ضروری تعدادی از آنتی اکسیدان های آنزیمی شناخته شده است. اندازه گیری گونه های واکنش گر اکسیژنی و ظرفیت آنتی اکسیدان کل ابزار مفید برای ارزیابی شرایط کشت است. تخمدان های موش nmari 14-12 روزه پس از جمع آوری برای گروه های آزمایشی زیر بکار گرفته شدند: آزمایش اول : مقایسه انجماد شیشه ای پوشش مستقیم با استفاده از غلظت های 4 ، 6 و 8 مول با انجماد شیشه ای رایج و برای هر گروه تست سمیت مربوطه در نظر گرفته شد. پس از انجماد – ذوب درصد زنده ماندن فولیکول های پره آنترال جدا شده، مورفولوژی و فراساختاری تخمدان ها مطالعه شد. آزمایش دوم : فولیکول های پره آنترال جدا شده در tcm199 در حضور غلظت های مختلف سدیم سلنیت (0 ، 5 ، 10 و 15 نانوگرم بر میلی لیتر) و سرم آلبومین گاوی (3 میلی گرم بر میلی لیتر) و یا سرم جنین گاوی (5 درصد) کشت شدند و سپس القاء تخمک گذاری با 5/1 واحد بر میلی لیتر گنادوتروپین جفتی صورت پذیرفت. درصد زنده ماندن، قطر فولیکول ها و تشکیل آنتروم و همچنین قطر و تکوین تخمک ها و تکوین جنینی ارزیابی شد. آزمایش سوم : میزان ros تولید شده در فولیکول های پره آنترال جدا شده از تخمدان منجمد شده و نشده پس از 0 ، 12 ، 24، 48 ، 72 و 96 ساعت کشت در حضور غلظت های مختلف سدیم سلنیت ارزیابی شد. همچنین ظرفیت آنتی اکسیدان کل و میزان فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز بررسی شد. نتایج آزمایش اول نشان داد که میزان زنده ماندن و مورفولوژی طبیعی فولیکول های اولیه و پره آنترال حاصل از گروه انجمادی رایج بالاتر از گروه حاصل از پوشش مستقیم بود (p<0.001) و ساختار فولیکول ها در گروه انجمادی رایج مشابه گروه غیرانجمادی کاملاً حفظ شده بود، اما تعدادی علائم دژنراسیون در فولیکول های حاصل از گروه انجمادی پوشش مستقیم مشاهده شد.نتایج آزمایش دوم نشان داد که میزان زنده ماندن فولیکول های کشت شده در حضور سرم جنین گاوی و غلظت های 5 و 10 نانوگرم بر میلی لیتر سدیم سلنیت (به ترتیب 23/88 و 83/90 درصد) بالاتر از گروه های دیگر بود (به ترتیب p<0.05 و p<0.001).میانگین قطر فولیکول ها (58/15 ± 84/199 میکرومتر) و درصد تخمک های متافاز دوم (08/33 درصد) در فولیکول های کشت شده در حضور سرم جنین گاوی و غلظت 10 نانوگرم بر میلی لیتر سدیم سلنیت بالاتر بود.نتایج آزمایش سوم نشان داد که تولید گونه های واکنش گر اکسیژنی در فولیکول های پره آنترال حاصل از تخمدان منجمد شده و نشده پس از 24 ساعت کشت افزایش یافت و ظرفیت آنتی اکسیدان کل و فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز وابسته به سلنیوم کاهش یافت (p<0.005) ، در حالیکه در حضور سدیم سلنیت میزان گونه های واکنش گر اکسیژنی کاهش و فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز وابسته به سلنیوم و ظرفیت آنتی اکسیدان کل پس از 96 ساعت کشت این فولیکول ها افزایش یافت و تفاوت معنی داری بین فولیکول های پره آنترال حاصل از تخمدان منجمد شده و نشده مشاهده نشد. میزان گونه های واکنش گر اکسیژنی در فولیکول های پره آنترال کشت شده ارتباط منفی با ظرفیت آنتی اکسیدان کل و فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز داشت. به طور کلی نتایج نشان داد که فولیکول های کشت شده در حضور سرم جنین گاوی و غلظت 10 نانوگرم بر میلی لیتر سدیم سلنیت، بلوغ و رشد بهتری داشتند و این اثرات با کاهش میزان گونه های واکنش گر اکسیژنی تولید شده و یا افزایش فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز و ظرفیت آنتی اکسیدان کل در طی کشت مداخله می شود